تحضير العينة:
جمع العينات: جمع عينات مثل الدم والأنسجة واللعاب والبول وفقًا لغرض التجربة.
استخراج الحمض النووي: استخدم مجموعة مخصصة لاستخراج الحمض النووي لاستخراج الحمض النووي من العينة.
تحضير رد فعل PCR:
الاشعال التصميم: تصميم أزواج تمهيدية محددة بناءً على التسلسل المستهدف لتضخيم الحمض النووي القالب.
إعداد خليط التفاعل: بما في ذلك القالب الحمض النووي ، الاشعال ، المخزن المؤقت ، بوليميريز الحمض النووي ، DNTPs (Deoxynucleoside Triphosphates) ، mg 2+ ، إلخ.
تعيين برنامج PCR:
إعدادات أداة PCR: أدخل معلمات دورة PCR مسبقًا ، مثل درجة حرارة التسخين المسبقة 95 درجة ، ودرجة حرارة التحويل (مثل 95 درجة) ، ودرجة حرارة الصلب (مثل 55 درجة) ، ودرجة حرارة التمديد (مثل 72 درجة) ، وعدد الدورات.
رد فعل PCR:
أضف عينة: أضف خليط التفاعل إلى خزان تفاعل PCR أو رقاقة ، وعادة ما يكون لكل عينة رد فعل واحد.
أداء PCR: دورات أدوات PCR وفقًا لبرنامج الإعداد المسبق ، بما في ذلك خطوات التدفئة والتبريد والصلصة والتمديد.
تحليل المنتج:
التبريد بعد التضخيم: بعد اكتمال PCR ، يتم تبريد العينة لفترة وجيزة في 4 درجة.
الفصل الكهربي: استخدم تقنية الهلام الكهربائي ، مثل agarose هلام الكهربائي ، لفصل منتجات PCR بأطوال مختلفة.
المسح الضوئي: تنبعث الاشعال المسمى fluorescase من طول موجي معين في المنتج المضخم ، ويقرأ أداة PCR هذه الإشارات ويسجلها.
معالجة البيانات وتفسيرها:
برنامج تحليل البيانات: استخدم برنامجًا متخصصًا لتحليل إشارة الفلورسنت وحساب تركيز أو تركيز الجزء النسبي للشظية المستهدفة.
تفسير النتيجة: استنادًا إلى منحنى PCR وخط الأساس ، حدد ما إذا كان PCR ناجحًا ، وما إذا كان الجزء المستهدف موجودًا ، وكم هو.
تسجيل النتيجة والحفاظ عليها:
سجل النتائج في التقرير التجريبي والحفاظ على البيانات والعينات الأصلية بشكل صحيح.